Née dans le New Jersey d'un père ingénieur et d'une mère enseignante, Jane Krajkowski (elle enleva son "j" lorsqu'elle débuta dans le métier) s'intéressa très tôt aux domaines artistiques : dès son enfance elle prend des cours de danse, ce qui l'aidera plus tard, par exemple lors du tournage de Dance With Me.
Mais sa première vraie expérience d'actrice eut lieu lors du festival de Williamstown (dans le Massachusetts), un festival très connu dans le milieu. Elle y rencontra ses futurs collègues : Calista Flockhart, et Gil Bellows, avec lesquels elle s'exerça plusieurs étés de suite, aux côtés de grands acteurs.
Elle joua dans le même temps dans Picnic, aux côtés de Gwyneth Paltrow, dont elle interpréta la soeur.
Elle obtint un prix de la meilleure actrice des critiques de Los Angeles pour son rôle dans One touch of Venus, et a été nominée pour plusieurs Emmy pour son rôle dans un soap, Search for Tomorrow.
Mais elle gagne vraiment une notoriété lorsqu'elle joue dans Ally McBeal : elle y interprète sa secrétaire un peu fouineuse, toujours à donner des conseils, qui tente d'être au courant des moindres potins, et qui fait essayer ses inventions les plus folles à Ally...
Par la suite, elle apparaîtra en guest star dans plusieurs séries : par exemple dans un épisode de Demain à la Une, ou dans deux épisodes d'Everwood. Elle a également prêté sa voix au film animé L'Age de Glace.